前言
根据亚利桑那大学的一项最新的研究显示，虾塘的盐度已被证明，对虾肠微孢子虫病(EHP)的传播有重大影响。
有研究表明，与低盐度(5ppt)的生长池塘相比，在盐度高的池塘中生长的南美白对虾患上EHP的机率更高。考虑到南美白对虾属于广盐性虾种，因此，我们迫切想知道，EHP在高(30ppt)、中(15ppt)和低(2ppt)盐度下的感染率是否相同。
一、对虾养殖中，最重要的疾病
肝胰腺微孢子虫病(HPM)是由微孢子虫EHP引起的，是目前对虾养殖中最重要的疾病。亚洲的主要虾生产国，包括中国、印度尼西亚、马来西亚、越南、泰国和印度，以及委内瑞拉都报道出现感染EHP的案例。
在感染EHP后的主要临床体征是生长缓慢，这导致南美白对虾出现规格大小不一致的情况增加。在疾病的晚期，被ehp感染的虾通常会显示出软壳，并慢性死亡。在一些病例中，EHP和弧菌的合并感染，会造成白便综合征(WFS)的出现。
EHP在肝胰腺中引起的组织病理学显示出现损伤，在细胞质内显示不规则/规则的嗜碱性包涵体，无论是否存在孢子。
南美白对虾感染EHP后的典型症状
二、不同盐度下的对虾养殖
据相关报道显示，在盐度范围很广的虾池中(低于5ppt到35ppt)都发现了存在EHP。在发现EHP的国家，高盐度池塘的发病率似乎高于低盐度池塘，但没有研究支持盐度与EHP感染水平之间可能存在的关系。本研究的目的是在实验条件下，以粪串作为接种物，比较EHP在三种不同盐度下的传染性。
三、三种不同盐度的南美白对虾感染EHP的情况
1、选用SPF级的南美白对虾(Litopenaeusvannamei)进行EHP挑战实验。虾被保持在3种不同的盐度（2ppt,15ppt和30ppt）。对于挑战实验中，实验池是由三个90升水箱组成，并引入与三种盐度相对应的人造海水，每一实验组的温度保持在25℃（±0.6）。
2、挑战测试：从已知的ehp感染的虾的粪便作为接种物用于实验挑战。每天通过感染ehp的池塘中收集标本。将一小部分保存在95%乙醇中以确定EHP含量，而其余部分作为接种物以挑战不同盐度的虾。挑战一小时后，虾再来投喂2%生物量的商业颗粒饲料。设计这种接种和投喂方式，是为了让南美白对虾在摄食颗粒饲料之前，先摄食含有ehp感染粪便的接种物。最终，这个挑战实验持续了25天。
南美白对虾出现感染EHP的迹象
四、结果与意义
1、在我们的研究中，我们能够用粪便作为接种物诱导实验性感染。粪便作为EHP接种物的来源，足以引起保持在三种不同盐度虾的感染。同时，我们用PCR和组织病理学方法也证实了，在EHP在盐度为2ppt、15ppt、30ppt时都可以导致南美白对虾感染EHP。但是我们的结果显示，EHP感染的流行率和严重程度，盐度30ppt高于盐度2ppt和盐度15ppt。
2、本研究表明，粪便可作为EHP的接种物用于挑战实验，同时表明感染性粪便也是孵化场和养殖池塘重要的传播源。利用甲壳类动物的蚕食行为和未消化饲料(占粪便物质的25%-50%)的存在，我们能够将EHP感染性孢子传递给虾，并进行实验挑战。我们的实验设计利用从确诊的EHP感染的虾中收集的粪便，模拟了在养殖场水平上观察到的EHP水平传播。在三种不同盐度下养殖的实验挑战下，虾肝胰腺组织的组织病理学显示出EHP感染的特征性病变，包括被感染上皮细胞的细胞质中存在疟原虫，胞浆胞质内具有成熟的孢子，以及肝胰腺管腔内存在孢子。
3、南美白对虾(Litopenaeusvannamei)是广盐性的一种，可以在各种条件下进行养殖，包括高盐度(30ppt)、河口环境(10-20ppt)和低盐度(2ppt)。这项研究证实，EHP能够在较大的盐度范围内引起感染，从2ppt到30ppt都可以引起感染EHP。然而，EHP感染的患病率在盐度30ppt时上升(87.5%的患病率)，而盐度15ppt是为(30.0%的患病率)，盐度2ppt为(33.3%的患病率)。
4、三种不同盐度下EHP感染程度的不同，可能是由于盐度对孢子感染的不同影响。孢子感染的关键阶段之一是孢子内渗透压的增加。盐度的差异导致低渗环境在2ppt和15ppt，而高渗环境在30ppt。这可能是通过增加孢子活化，来提高孢子的感染程度。
五、实际应用
在亚洲一些EHP流行地区的池塘中，发现盐度条件变化很大。例如，在印度，有高低盐度的虾养殖区。有趣的是，在年在安得拉邦进行的虾病调查所观察到的那样，EHP的流行率似乎在盐度越低时就越低(低于5个百分点)。
在委内瑞拉的两个主要虾养殖区也记录了类似的情况——马拉开波湖，盐度约为4-6ppt，而在猎鹰州，盐度相差36-40ppt。在委内瑞拉，虾养殖业没有完全整合，无节幼体和虾苗在猎鹰和马拉开波湖地区之间的移动是一种常见的做法。尽管在这两个地区之间有可能被EHP感染的幼体/虾苗进行交叉传播，但迄今为止只在猎鹰地区的盐度高的地方检测到EHP。在含盐量较低的马拉开波湖，尚未有EHP的报道。因此，马拉开波湖对虾养殖场未发现EHP，可能是由于水体盐度的差异。
六、结论
本研究表明，已知感染EHP虾的粪便可作为一种可靠的接种源，也可以通过粪口途径进行传播疾病。EHP感染可发生在盐度低至2ppt的水体中，但盐度为30ppt时感染的流行率和严重程度更高。这些发现对EHP流行地区的疾病管理具有意义。
在对虾养殖区，环境污染是一个主要问题，养殖户可以通过养殖无污染的虾苗，对养殖环境进行彻底消毒，以及使用底膜，将感染的风险降至最低。我们也可以在低的盐度(15ppt)中养殖，以便能够减少EHP感染的严重程度。
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